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门冬氨酸鸟氨酸的色谱方法

时间: 2012-03-25 17:21:01 作者: 来源: 字号:
门冬氨酸鸟氨酸遇到的问题:
1.使用氨基柱时基线很难平衡,色谱方法(磷酸二氢钾0.01mol/l:乙腈=50:50波长200nm)试着降低了一下盐的浓度(0.005mol/l)还是挺难平衡什么原因呀
2.冲柱子时我现在用的是先用25%的异丙醇然后再用用纯异丙醇冲洗结果柱压挺高的大约2000多psi是不是冲洗的方法不对呀
3.色谱方法是不是有问题还是选择的检测器有问题我现在用的是紫外检测器是不是灵敏度比较低呀!浓度挺大的(2mg/ml)结果峰面积挺小的
4.使用纯异丙醇冲洗完之后是不是容易堵柱子,必须得用甲醇把管道里的液体冲出来,我记得以前没遇到这种情况是不是试剂有问题呀?




1、色谱柱难平衡可能与波长有关系,试试乙腈-水好不好平衡,查查是仪器的原因,还是流动相的原因。
2、异丙醇是液相常用溶剂中粘度最大的,压力高正常,必要时降低流速。
3、紫外检测器的灵敏度一般都差不多,可能是样品的紫外吸收太弱,做紫外扫描看看。
4、纯异丙醇不会堵柱子,就是柱压高,一般柱子都能耐受,没必要置换。




谢谢楼上的这位不是堵柱子,是堵管道,刚才太着急了说错了尤其是进样阀与柱子那一段管道




没有道理,管道的内径比色谱柱孔径大了不知道多少倍。




1、据我了解氨基柱就是不好平衡,你可以尝试低流速走一夜,第二天再进行试验

2、峰面积小是什么概念啊,你是做什么,含量还是有关物质啊,这个浓度是根据最小检测限定的
3、异丙醇冲柱子正确,压力高也是正确的,异丙醇粘度大所以压力高,可以尝试检测流速




氨基柱子,200nm 肯定不好平衡,,且柱子消耗快。




楼上说的太对了,这根氨基柱刚买的用了没两天柱压就不稳啦,我怀疑是不是检测器不太合适我以前做过氨基酸的都是衍生的方法现在用这种方法可能不太适合吧




我以前做过这个品种,将自己的感想做一下简单描述:
液相色谱仪:戴安U-3000型
(1)使用氨基柱,紫外低波长检测。
优点:样品不用衍生就可以用来做含量;也可以用来做有关物质,虽说峰高到不了1000以上,600左右还是可以到的。
缺点:(a)样品浓度过高,2mg/ml以上很正常,我们做过5mg/ml的,重复性较差,做有关物质还将就,做含量绝对不可以的。(b)系统不稳定且管路容易堵塞。(c)在做有关物质时,会出现一个富马酸的峰,且峰面积比较大,不同厂家的门冬氨酸造成富马酸的峰面积差异较大,影响有关物质的真实检测。

(2)使用C18柱紫外检测器检测,样品衍生后测定含量。
优点:测定过程比较稳定,重复性还算比较好。
缺点:(a)衍生剂对各种氨基酸的衍生程度不一样,不能真实反映原样品中各氨基酸的真实组成,结果不可靠。(b)只能用来做含量,不能做有关物质,因为样品衍生后系统会出很多杂峰。(c)样品量较小,衍生过程繁琐,重复性较差,同一个人一直做,效果还不错。

该方法由于存在缺点(a),在2010年药典征求意见稿时出现在第七批,但是未收载在2010年药典的主要原因。

(3)使用示差折光检测器测定。
优点:样品不用衍生。
缺点:检测器灵敏度太低,不能真实反映样品的组成,同时富马酸会有干扰。

(4)使用离子色谱仪测定(本人未使用过,听药典会老师讲的,效果很好)。
优点:样品不用衍生,灵敏度高,结果准确。
缺点:成本太高。

你可以根据实际情况,选择合适的方法进行检测,祝楼主好运!




谢谢楼上的大哥的经验之谈,不胜感激!
是不是缓冲盐的问题呀可是换成氨盐之后还是这样呀换成磷酸二氢氨之后还是这样虽然能分开但是第一个峰肩峰挺明显可能是上述的富马酸的峰与门冬氨酸未分开,今天扫了一下紫外溶剂在200nm的末端吸收挺明显有没有更好的方法呀




使用液质联用LC-M/MS Q-TRAP 检测氨基酸,可以降低基质的干扰,北京艾米诺医学研究有限公司对外提供这样的服务,可以有多种方法学。如果需要,可以联系我们**,或者站内短信聊
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在氨基柱色谱条件下,门冬氨酸峰与富马酸的峰相差10多分钟,分离效果很好的。

要拿这个条件来做有关物质时,一定要注意富马酸的量,注意浓度差异和峰高/峰面积差异,以免造成误导!




不知道是不是工艺不一样,为什么会有富马酸杂质呢
还有,这个品种的液相色谱有我做的有四个峰呢




你只要是买门冬氨酸合成的,就会有富马酸的峰。

富马酸是门冬氨酸的一个已知杂质,不管门冬氨酸是发酵的、合成的还是植物提取后再合成的,都会有富马酸,我当时在做这个品种的时候,把国内所有生产氨基酸厂家的门冬氨酸都买了,结果都有富马酸,就是量多少不一样而已,差别很大,最大和最小的差别有10倍之多。





随便说两句
氨基酸类用氨基柱来测结果并不好,相对来说,氨基柱在水性流动相条件下还是反相柱,这个品种建议用更强极性的柱子,效果很不错
衍生化建议大家不要用,测含量还凑合,但也得注意线性和回收率问题。测有关物质那杂七杂八的溶剂峰也够你受的
示差折光没用过
离子色谱成本是最低的,除了水就是KOH或碳酸钠之类的,可以说是最经济的办法




我用氨基柱做过,效果不好,柱效下降很快,保留时间也不稳定。




检测波长低肯定难平衡,峰面积小只有通过做检测限确定最终检测浓度




进一步研究,发现这个色谱方法的重现性挺差的进3针保留时间相差挺大都一分钟多






差别大是你自己的系统问题,我们原来做的时候,只会说是峰面积有一定差异,出峰时间重复性很好的!





是不是PH不适应,我调了PH就好了,但峰面积变化大




楼主你好,一般来说氨基柱的确很难平衡。出厂时氨基柱通常是保存在正庚烷中的,建议先用纯异丙醇小流速冲洗过夜(时间最好稍微长一些),先过渡一下,然后再用含有0.5%氨水的流动相小流速冲洗,平衡(此处需要的时间比较长)。需要注意的是,氨基柱在刚使用时流速一定不要太大,一0.1~0.2ml/min为好。当然,也可以试试用0.5%~1.0%的氨水溶液:乙腈=50:50冲洗50个柱体积,不过在这之后需要用相同比例的水和乙腈把多余的氨基除去,之后再上流动相操作。  2    1 2 下一页 尾页
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