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大鼠被动皮肤过敏试验

时间: 2012-04-16 14:21:01 作者: 来源: 字号:
在注射剂的安全性实验中,大鼠被动皮肤过敏试验应如何测定蓝斑直径,是测量单个直径,还是测量大鼠身上所有的蓝斑直径,其方法如何操作!结果如何评价.
我现在正在做实验,急求各位回答!
谢谢!




色斑大小的测定可采用直接测定法或比色测定法。直接测定法是指取对照组和用药组两组的蓝色斑直径的平均值,计算出变化百分率。比色测定法是将蓝色斑片剪下,剪碎后加入丙酮-生理盐水(7:3)混合液5-6ml,浸泡后次日离心,在610nm波长处测定其吸收度。取两组的吸收度平均值,计算出变化百分率。




评价有两种方法,一种是呈阳性反应的最高稀释倍数的抗体效价为指标。另一种是固定的血清稀释倍数后以色斑的大小或光密度值为指标。直径在5mm以上者判定为阳性。应提供蓝斑照片。




谢了!欢迎各位老师指教!因为不是圆形如何测量蓝色斑直径?




新药指导原则上有明确的方法,与对照组比较,直径大于5cm为阳性。




一般结果蓝斑直径和皮内注射药物的浓度剂量有关,必须测量每个蓝斑直径,相同剂量组的计算平均直径。不是圆形的斑可分割计算面积再换算出直径不是很难吧?




是否只测量注射部位对应的皮内兰斑




只测量注射部位对应的皮内兰斑即可




大鼠PCA大家用的阳性药一般是什么?剂量是多少?




谢谢pony2,阳性药的牛血蛋白,卵蛋白等,具体剂量见指导原则




苦木注射液被动皮肤过敏试验

摘要
试验选用健康大鼠,制备各受试物IgE抗血清,致敏并攻击动物,测定动物皮肤蓝色反应斑直径。试验结果显示受试品被动皮肤过敏性反应阴性。

试验目的
观察苦木注射液的被动皮肤过敏性反应。

受试药物
苦木注射液(浓配液,含总生物碱0.75mg/ml),棕色透明液体,制药有限公司提供,批号:050205。临床用法用量:2ml/支(含总生物碱0.5mg),淡黄色透明液体,肌肉注射,一次2-4ml,一日1-2次,临床人用量为0.033mg/kg(以总生物碱计)。

试剂
0.9%氯化钠注射液,四川科伦药业股份有限公司生产,批号:20041022。

试验动物
健康Wistar大鼠48只,体重180-200g,雌雄兼用,由实验动物中心提供,动物合格证号:桂医动字第11005号。

动物饲养条件
空调控温,换气扇通风,光照12h/日,食固体混合饲料,饮自来水,按性别分笼群养,每天清扫笼舍一次,室温20-22oC,相对湿度50-60%。

试验方法
① 致敏:选取健康大鼠24只,随机分为4组,每组6只:苦木注射液大剂量组(1.125mg/kg)、苦木注射液小剂量组(0.56mg/kg)、阳性对照组(10%鸡蛋清液,0.15ml/100g)、空白对照组(0.9%氯化钠注射液,0.15ml/100g)。实验室适应饲养5天后开始试验,按无菌操作,苦木注射液组肌肉注射苦木注射液0.15ml/100g,阳性对照组同法注射新鲜10%鸡蛋清液0.15ml/100g,空白对照组同法注射0.9%氯化钠注射液0.15ml/100g。隔日致敏一次,共5次。
② 制备血清:各组末次致敏后10天,挖眼球采血,低速离心,制备抗血清,置冰箱备用。
③ 大鼠脱毛:选取健康大鼠24只,随机分为4组,每组6只:苦木注射液大剂量组(1.125mg/kg)、苦木注射液小剂量组(0.56mg/kg)、阳性对照组(10%鸡蛋清液,0.15ml/100g)、空白对照组(0.9%氯化钠注射液,0.15ml/100g)。实验室适应饲养5天后可以用来做试验。试验前一天,用10%硫化钠溶液(先用20%水溶解,再加乙醇至刻度)脱毛,对各组大鼠进行脱毛。
④试验过程:将各组含IgE的抗血清分别用生理盐水稀释成不同倍数(1:10,1:30,1:50稀释度),在动物背部脊柱两侧脱毛区用记号笔划直径1厘米,相距1厘米,左右对称的六个圈(见附图1),依次由前向后皮内注射各对应组的抗血清(见附图2),48小时后,各组动物进行抗原攻击,静脉注射与致敏剂量相同的激发抗原(含0.5%的伊文思蓝染料)(见附图3),30分钟后将动物处死,剖取背部皮肤,铺平后测量皮肤内侧的蓝色反应斑直径,同时拍摄照片,结果见附图4(正常皮肤)、附图5(阴性组皮肤)、附图6(阳性组皮肤)、附图7(大剂量组皮肤)。
⑤ 评价方法:固定的血清稀释倍数后以色斑的大小为指标。

试验结果
苦木注射液组和阴性对照组均未出现被动皮过敏反应症状,而阳性组大鼠被动皮肤过敏反应症状明显,出现直径在5mm以上的蓝斑,呈阳性反应。试验结果见表4。

表4:苦木注射液对大鼠被动皮肤过敏反应蓝斑大小的影响
组别  动物数(只)  注射不同浓度血清各注射点的蓝色反应斑直径(mm)
    浓度血清(1:10)  浓度血清(1:30)  浓度血清(1:50)
阴性组  6  0  0  0
阳性组  6  9.13±2.23  7.50±2.27  3.63±1.30
大剂量组  6  1.00±1.20  0.63±0.74  0.50±0.76
小剂量组  6  0.63±0.74  0.50±0.76  0.25±0.46
从表4可以看出,大剂量组高浓度血清蓝斑直径为1.00毫米,小于5毫米,阳性组在此浓度下血清蓝斑直径为9.13毫米,呈强阳性反应,说明该药被动皮过敏试验为阴性,临床应用安全。

结论




请问:不是圆形的斑如何分割计算面积再换算出直径呢?谢谢




如出现不规则图形,可将该图形分割为矩形、梯形、三角形等,分别按这些图行的面公式计算出面积,再相加起来,用圆的面积公式S=πR2,计算出R,再用Rx2不就的到直径吗?




知道了,谢谢!




我前几天刚做过一遍,附个图看看:





问题?卵蛋白和小牛血清蛋白分子量很大,是否不容易透过血管壁,这样做为阳性药物如何激发PCA的阳性反应啊?  2    1 2 下一页 尾页
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