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如何证明一个药物能否进入细胞

时间: 2012-04-30 01:21:01 作者: 来源: 字号:
药物的作用靶点在细胞膜上还是细胞内,需要如何证明,有什么好的方法?

或许有人说,可以用荧光染料标记药物,然后观察染料药物复合物能否进入细胞,方法简单,但标记后的药物就不是药物本身了,进去与否不能完全代表药物本身的膜渗透性。

用放射性同位素标记药物吧,这样不改变药物本身的任何性质,但这种标记比较麻烦。

按道理观察一个药物能否进入细胞的想法应该很容易就能想得到,但如何证明却无从下手。

请站内的战友讨论给点意见!




什么药




氟哌啶醇改构后的药物




只要测一下细胞内是否有药物存在就行了,但不同的药物测定方法不同,如此笼统的问题无人能够回答。




假如那个药的机制是作用于细胞膜,那么就在细胞培养基里添加药物培养看看出现什么结果






你指的是用药物孵育细胞,然后洗去细胞外液中的药物,然后消化细胞,破碎,再测药物的浓度?

我觉得这个问题还是比较清楚,就是想看看一个药物,能不能进入细胞的证明方法





如果细胞内存在药物了,那测量的方法就不算太难,比如用高效液相等等。但这里有个问题,如果药物不进入细胞而作用于细胞膜上,那么如何洗干净膜上的药物。这是一个问题。




感谢你的PM!

对于你的这个问题,首先我要说我没哟接触过,所说的一切都是凭空想象,仅供你参考。

1.用荧光染料标记药物,然后观察染料药物复合物能否进入细胞,方法简单。但是你认为标记后的药物就不是药物本身了,进去与否不能完全代表药物本身的膜渗透性。 这个说法有待进一步确定,,我强烈建议你查查相关的资料,我感觉应该是有-无损的荧光标记物-的。

2.免疫荧光的方法和上面的直接给药物标记上荧光是不一样的。具体:第一步:给药,第二部用免疫荧光方法检测你的药物,如果荧光出现在细胞膜上,则说明药物在膜上,如果在细胞内出现荧光,则说明药物进入了细胞内部。

虽然说用免疫荧光的方法是可以解决的,因为免疫组化最大的优点就是定位。

但是,真正实施起来的话,我感觉并不是很容易,很有可能你可以用免疫荧光检测到抗原的存在,但是判断是在膜上还是胞内,并不是很容易,一方面是细胞膜有膜的内侧面和外侧面两个面,如果药物结合在膜的外侧面还好点,但是如果药物穿透膜了,但是却结合在膜的内侧面呢。这只是一个原因,第二个不容易的原因是免疫荧光对结果的一个级联放大效应,就是本来一个很小的抗原,我们看不到,但是通过一抗和抗原结合,二抗再和一抗结合,就把抗原给放大了。一放大的话有时候就不一定看出来是在膜内还是膜外了。我们检测一个膜外的受体,肯定是在膜上的,但是当看到免疫荧光的结果以后,我自己都怀疑是不是抗体出问题了。
我给你发个图片,你看看这个图片上的受体是在膜外还是膜内。呵呵

3.既然你已经确定放射性标记可行,虽然麻烦,但是如果上面的办法不能解决的话,也得用啊。

而且我建议你可以三种方法一起用,这样说服里更强的。






这是一张膜受体的免疫荧光。




研究药物能否进入细胞,一个比较直观的方法,就是楼主所说的,用荧光标记。然后用膜染料(例如Wheat germ 488)、核染料(Hoechst 33258)及荧光标记的药物,进行共聚焦或者共定位检测,基本可得到一个解释得过去的结论的。至于你说的“标记后的药物就不是药物本身了,进去与否不能完全代表药物本身的膜渗透性”,不知道你的药物是什么,不好做结论。但是按照你这种说法,所有利用标记来track药物在体内distribution的方法都不可行的,所有以前的published work都是不可信的: 因为只要一标记,无论是放射性还是非放射性,都会改变药物本身的理化性质,例如极性、电荷等等。
如果你多设立几个对照,结果应该是可信的,例如荧光分子本身、类似药物+荧光标记、待测药物+荧光标记、待测药物不标记等等。






非常感谢你的回帖。

我们的药物是一个氟哌啶醇改造后的化合物,分子量也就600以内,如果要用免疫荧光标记的方法,那首先得有这个药物的抗体才行,但目前没有,而且我们的药物不是多肽或蛋白类,所以至于抗体如何获得或制备,这方面我不懂;

说到荧光标记,这里我强调一下,用荧光去标记一个药物和免疫荧光标记还是不同的。用荧光染料去标记一个药物是用化学合成的方法合成染料和药物的复合体,其实就是合成了一个新的化合物,只不过这个化合物里带有能发出荧光的基团。而此时新的化合物理论上讲就不是原来药物本身了。

至于放射性标记,这个我了解的不多,但如果要用放射性同位素标记,实际上就是用含放射性同位素的物质来合成我们的药物,这样得到的药物结构上没有变化,但里面含有放射性同位素 ,就可以通过检测放射性同位素的方法来检测这个药物。但这种方法需要长时间曝光,可能也无法相对准确定位药物在细胞内的位置,比如说细胞器上。同时也考虑到合成以及同位素操作上的难度,这个方法也就没有太多去了解。

以上不知道我说的明白明白,如果不明,请不吝指出,谢谢





粗粗一看,如果红色荧光代表我的目标物的话,那说明这个物质(蛋白或其他 被标记的东西)基本上位于细胞胞浆中,胞膜上很少(但不排除),细胞核也很少。

仔细想想,如果这张图片是用普通荧光显微镜拍的,那基本能得到以上的信息。如果想确定是在胞膜或细胞核上有没有,那可以进一步用胞膜或细胞核的荧光染料复染,看看他们的共定位情况。

如果使用共聚焦做的,那基本上胞膜可以认为很少有这个 物质存在。

以上是我的观点





谢谢你的回帖,首先你提出的质疑我也想到过,但不管可不可行,起码理论上似乎是这样的,我在上面的回帖已经提到 过。

如果要观察药物在体内的分布,我觉得这个可以用荧光染料合成标记的方法可以实现,现在的活体成像荧光就适合这个实验。  2    1 2 下一页 尾页
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