最近分一个部位，一共就只有两个成分，按部就班地用液相分离，20mm的制备柱，保留时间相差10分钟左右的两个非常漂亮的峰，一鼓作气就分开了，浓缩后再用分析柱检测，就傻眼了！分得的两个部分的图谱竟然一样，也就是说分了之后跟没有分的之前竟然是一样的，我怀疑是我弄错了，又反复做了几次，竟然依然如此，之前用的ODS柱，后来换了c18-cholester柱子，但效果依然如故，分离效果相当好，但就是分不开！！我抓狂了！！！！
求教！！

擦，感觉跟我要做的很相似啊，我也是要分个有效部位，成分也为2个，目前也是用的是cholester柱子，保留时间差5min左右，刚买了个20mm的胆甾醇柱，希望不要出现你这种情况。
好好想想实验过程，看看有没有出差错的地方，样品污染了？其他还真想不出原因来了

如果有条件的话建议楼主将制备色谱的条件转移到分析柱看能否重复分离得到2个峰，然后再连MS确认两个峰是否一样？
另外将制备液相出来的流分在浓缩前MS分析是否一样？
如果不一样则有可能分析柱所用的色谱方法分不开这两个峰；
如果浓缩前MS不一样，浓缩后一样可以考虑是不是其中一个组分加热不稳定？
如果MS都一样就要考虑制备的时候是不是因为样品溶剂对样品溶解性过大导致样品未充分被色谱柱保留就被流动相洗脱出来了。


为什么不用cholester柱子了，而改用胆甾醇柱啊？有何道理呢？也是我这样的，看起来分开了，其实没有分开？


cholester柱子就是胆甾醇柱啊
你可以试着降低一下进样浓度，看看出来的结果是不是一样。
如果还一样的话，仔细收集馏分，不要浓缩，先分析，有条件就上质谱。
或者你可以分别收集两个峰，然后再进一步用制备柱分离，看看是不是还是这样出两个峰。
实验就是这样总会有意想不到发生，不过这也就是乐趣吧。
就像我现在做的东西，天天都都有惊喜，不过是郁闷的惊喜，哈哈

w为什么一定要用液相呢，你分出来后可以点板啊，正反相都点下看，看化合物的点纯不纯，或者有没有主斑点！