液相分离只有两个峰的样品，用45%甲醇的时候，发现两个峰几乎在一起了，试了40%、35%，都不能分开，最后尝试了30%，基本上算是分开了，但保留时间也太长了，一针（C18分析柱4.6*250）进去，要2.5小时才出峰，若是换成制备柱时间肯定更长，而且峰型会严重拉宽变形。
请教：有没有好的办法，保证分离效果的同时，缩短保留时间，

换个柱子，各种柱子，加各种缓冲剂，都试试。

改梯度洗脱试一试呢，或者更改流动相用乙腈吧。

1、考虑梯度洗脱；2、考虑换流动相；3、换柱子，不一定非要C18吧

将流动相更换为乙腈，乙腈的洗脱能力强于甲醇

直接用分析柱套针慢慢制吧，反正就两个峰，应该好套，不然就算了，做更好做的样品

可以考虑流动相里加乙腈，或换用150mm的柱子

没有其他杂质的话，连续进样，应该不算慢的！

流动相换成缓冲液（磷酸盐或者Tris-HCl）加乙腈，梯度洗脱试试呢，我用过效果还不错的