我正做半制备HPLC，是个新手，我的流速调到3ml/min，柱压有12Mpa，用的是伊力特的柱子，用UV检测，样品不是很干净，只有1ml，每针进10ul。柱子是反着做的，正着做嫌柱子压力太高了。头疼的是没做几针，峰形有很大的变化，柱压每进一针都有0.5MPa的升高，用二氯甲烷活化了一下，柱压下降了，接着做，但是没做几针，峰形又有很大的变化，现在感觉柱子都不能保留了，10min之内东西全不下来了。希望高手指点指点，我只要得到其中主要的物质就可以了。

C18柱

你的柱子快废了，换个柱子吧

12Mpa？？？？

我觉得样品还是应该要预处理下，哪怕只是简单的过滤。还有是不是该考虑这个方法是不是恰当，或者换种思路、方向可能更好。

C18柱不应该用二氯甲烷活化吧。。上样前一定要过滤啊

先过凝胶 砍段 一定要能用甲醇或乙腈溶解

肯定要过滤啊，样品少，可以用注射器前面加个过滤头啊，也不损失多少啊~~