大家好，小女子初接触液相，遇到一个问题请大家指教，我分离一个手性化合物，自己摸索的方法，图谱如下，最后面两个峰是异构体的峰，我的疑问是为什么前面那么多小的杂峰，做了很多遍都这样，我的流动相是正己烷：乙醇：TFA=85:15:0.1 ,0.8流速，210nm，我虽然知道在这个波长下溶剂出峰，那前面大峰可以理解，但紧跟大峰怎么这么多小峰啊！我想知道怎么改进消除这些杂峰，注：我的标准品很干净，不是样品的问题。我要做药品注册方法验证，这样的图谱不行啊！望不吝赐教！！万分感激！！
210nm，背景吸收会相对比较高，如果经费允许，建议选择一些质量相对较好的试剂，譬如默克的。
TFA易被氧化而形成鬼峰，使用时请注意。
另外，问一句，210nm波长，是有什么依据而选择的么？你的样品RT7左右的出峰，灵敏度和响应值都不高啊。
1是溶剂本身不纯，建议换别的公司的
2进针空白，看是不是样品里的杂质
3换不同的检测波长，必要的话换别的检测器
您说的很对，TFA易被氧化而形成鬼峰，我用的TFA时间很久了，且不是HPLC专用的。但我查了查Sigma的TFA，HPLC专用的10ml要2000多块钱，是有点贵，不知道那里有便宜点但可以符合药品注册规定的标准的TFA，我刚刚工作，不好意思老是跟领导申请买东西，刚买的手性柱。
选择210nm是因为我的主峰有文献做过（但不是手性分离），文献用的210nm，而且我用紫外扫描过异构体在192nm（浓度小时），201nm（浓度大时）有最大吸收。
响应值小是因为，本来其中我们想要的D异构是能用反相条件得到很好的峰形和响应值，但用反相的条件不能做手性分离，我试了很多反相的条件都不行，后来只能改为正相，也试过不少正相条件后终于勉强可以分开了，但响应值不高，但如果把量加到200mg峰还是挺高的，只不过溶剂峰太高了。而且这两个异构体在正相条件下都几乎不溶，甲醇几乎不溶，乙醇，异丙醇，正己烷更不溶，所以没办法，我加了些0.1%的TFA，最后结果就这样了。
我工作后刚刚接触液相，我们这边没有专门做液相和研发的师傅，所以这个摸索过程也是自己一点一点查资料和请教论坛上的前辈才做到的，真的很不专业，请不要见笑
您，原因1：正己烷和乙醇都是色谱纯，TFA是化学纯
原因2：样品用反相条件也可以做，几乎没有杂质
1、进空白1不含TFA、空白2含TFA验证是否已被氧化形成鬼峰（是否可用）
2、看是否可以用其他检测器检测。
3、继续摸索新方法
好的，真是您，您做药品注册吗？我想问问2,4-二硝基氟苯是剧毒化合物，国标网和SIgma都不愿意卖，我能用它来做药品注册氨基酸衍生吗?我的产品里有一个杂质是氨基酸，药典上有个类似的药品也是用2,4-二硝基氟苯做的有关物质测定，但有同仁建议我不要用剧毒的物质来做药品注册，想看看您的意见！！万分感激
化学物质毒性数据库显示：
*** CHEMICAL IDENTIFICATION ***
RTECS NUMBER : CZ7800000
CHEMICAL NAME : Benzene, 2,4-dinitro-1-fluoro-
CAS REGISTRY NUMBER : 70-34-8
BEILSTEIN REFERENCE NO. : 0398632
REFERENCE : 4-05-00-00742 (Beilstein Handbook Reference)
LAST UPDATED : 199710
DATA ITEMS CITED : 14
MOLECULAR FORMULA : C6-H3-F-N2-O4
MOLECULAR WEIGHT : 186.11
WISWESSER LINE NOTATION : WNR BF ENW
COMPOUND DESCRIPTOR : Agricultural Chemical
Mutagen
SYNONYMS/TRADE NAMES :
* Benzene, 1-fluoro-2,4-dinitro-
* 2,4-Dinitrobenzene fluoride
* 2,4-Dinitrofluorobenzene
* 2,4-Dinitro-1-fluorobenzene
* 2,4-DNFB
* 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene
* 1,2,4-Fluorodinitrobenzene
*** HEALTH HAZARD DATA ***
** ACUTE TOXICITY DATA **
TYPE OF TEST : LDLo - Lowest published lethal dose
ROUTE OF EXPOSURE : Oral
SPECIES OBSERVED : Rodent - rat
DOSE/DURATION : 50 mg/kg
TOXIC EFFECTS :
Details of toxic effects not reported other than lethal dose value
REFERENCE :
NCNSA6 National Academy of Sciences, National Research Council,
Chemical-Biological Coordination Center, Review.(Washington, DC)
Volume(issue)/page/year: 5,17,1953
TYPE OF TEST : LDLo - Lowest published lethal dose
ROUTE OF EXPOSURE : Administration onto the skin
SPECIES OBSERVED : Rodent - mouse
DOSE/DURATION : 100 mg/kg
TOXIC EFFECTS :
Details of toxic effects not reported other than lethal dose value
REFERENCE :
CNREA8 Cancer Research. (Public Ledger Building, Suit 816, 6th & Chestnut
Sts., Philadelphia, PA 19106)V.1- 1941-Volume(issue)/page/year:
29,179,1969
TYPE OF TEST : LDLo - Lowest published lethal dose
ROUTE OF EXPOSURE : Subcutaneous
SPECIES OBSERVED : Rodent - mouse
DOSE/DURATION : 100 mg/kg
TOXIC EFFECTS :
Details of toxic effects not reported other than lethal dose value
REFERENCE :
BIJOAK Biochemical Journal.(Biochemical Soc. Book Depot, POB 32, Commerce
Way, Colchester, Essex CO2 8HP, UK)V.1- 1906- Volume(issue)/page/year:
41,558,1947
** MUTATION DATA **
TYPE OF TEST : Mutation in microorganisms
TEST SYSTEM : Bacteria - Salmonella typhimurium
DOSE/DURATION : 5 ug/plate
REFERENCE :
SAIGBL Sangyo Igaku.Japanese Journal of Industrial Health.(Nippon Sangyo
Eisei Igakkai, Kosu Eisei Bldg., 1-29-8, Shinjuku, Shinjuku-ku, Tokyo 160, 2 1 2 下一页 尾页
210nm，背景吸收会相对比较高，如果经费允许，建议选择一些质量相对较好的试剂，譬如默克的。
TFA易被氧化而形成鬼峰，使用时请注意。
另外，问一句，210nm波长，是有什么依据而选择的么？你的样品RT7左右的出峰，灵敏度和响应值都不高啊。
1是溶剂本身不纯，建议换别的公司的
2进针空白，看是不是样品里的杂质
3换不同的检测波长，必要的话换别的检测器
您说的很对，TFA易被氧化而形成鬼峰，我用的TFA时间很久了，且不是HPLC专用的。但我查了查Sigma的TFA，HPLC专用的10ml要2000多块钱，是有点贵，不知道那里有便宜点但可以符合药品注册规定的标准的TFA，我刚刚工作，不好意思老是跟领导申请买东西，刚买的手性柱。
选择210nm是因为我的主峰有文献做过（但不是手性分离），文献用的210nm，而且我用紫外扫描过异构体在192nm（浓度小时），201nm（浓度大时）有最大吸收。
响应值小是因为，本来其中我们想要的D异构是能用反相条件得到很好的峰形和响应值，但用反相的条件不能做手性分离，我试了很多反相的条件都不行，后来只能改为正相，也试过不少正相条件后终于勉强可以分开了，但响应值不高，但如果把量加到200mg峰还是挺高的，只不过溶剂峰太高了。而且这两个异构体在正相条件下都几乎不溶，甲醇几乎不溶，乙醇，异丙醇，正己烷更不溶，所以没办法，我加了些0.1%的TFA，最后结果就这样了。
我工作后刚刚接触液相，我们这边没有专门做液相和研发的师傅，所以这个摸索过程也是自己一点一点查资料和请教论坛上的前辈才做到的，真的很不专业，请不要见笑
您，原因1：正己烷和乙醇都是色谱纯，TFA是化学纯
原因2：样品用反相条件也可以做，几乎没有杂质
1、进空白1不含TFA、空白2含TFA验证是否已被氧化形成鬼峰（是否可用）
2、看是否可以用其他检测器检测。
3、继续摸索新方法
好的，真是您，您做药品注册吗？我想问问2,4-二硝基氟苯是剧毒化合物，国标网和SIgma都不愿意卖，我能用它来做药品注册氨基酸衍生吗?我的产品里有一个杂质是氨基酸，药典上有个类似的药品也是用2,4-二硝基氟苯做的有关物质测定，但有同仁建议我不要用剧毒的物质来做药品注册，想看看您的意见！！万分感激
化学物质毒性数据库显示：
*** CHEMICAL IDENTIFICATION ***
RTECS NUMBER : CZ7800000
CHEMICAL NAME : Benzene, 2,4-dinitro-1-fluoro-
CAS REGISTRY NUMBER : 70-34-8
BEILSTEIN REFERENCE NO. : 0398632
REFERENCE : 4-05-00-00742 (Beilstein Handbook Reference)
LAST UPDATED : 199710
DATA ITEMS CITED : 14
MOLECULAR FORMULA : C6-H3-F-N2-O4
MOLECULAR WEIGHT : 186.11
WISWESSER LINE NOTATION : WNR BF ENW
COMPOUND DESCRIPTOR : Agricultural Chemical
Mutagen
SYNONYMS/TRADE NAMES :
* Benzene, 1-fluoro-2,4-dinitro-
* 2,4-Dinitrobenzene fluoride
* 2,4-Dinitrofluorobenzene
* 2,4-Dinitro-1-fluorobenzene
* 2,4-DNFB
* 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene
* 1,2,4-Fluorodinitrobenzene
*** HEALTH HAZARD DATA ***
** ACUTE TOXICITY DATA **
TYPE OF TEST : LDLo - Lowest published lethal dose
ROUTE OF EXPOSURE : Oral
SPECIES OBSERVED : Rodent - rat
DOSE/DURATION : 50 mg/kg
TOXIC EFFECTS :
Details of toxic effects not reported other than lethal dose value
REFERENCE :
NCNSA6 National Academy of Sciences, National Research Council,
Chemical-Biological Coordination Center, Review.(Washington, DC)
Volume(issue)/page/year: 5,17,1953
TYPE OF TEST : LDLo - Lowest published lethal dose
ROUTE OF EXPOSURE : Administration onto the skin
SPECIES OBSERVED : Rodent - mouse
DOSE/DURATION : 100 mg/kg
TOXIC EFFECTS :
Details of toxic effects not reported other than lethal dose value
REFERENCE :
CNREA8 Cancer Research. (Public Ledger Building, Suit 816, 6th & Chestnut
Sts., Philadelphia, PA 19106)V.1- 1941-Volume(issue)/page/year:
29,179,1969
TYPE OF TEST : LDLo - Lowest published lethal dose
ROUTE OF EXPOSURE : Subcutaneous
SPECIES OBSERVED : Rodent - mouse
DOSE/DURATION : 100 mg/kg
TOXIC EFFECTS :
Details of toxic effects not reported other than lethal dose value
REFERENCE :
BIJOAK Biochemical Journal.(Biochemical Soc. Book Depot, POB 32, Commerce
Way, Colchester, Essex CO2 8HP, UK)V.1- 1906- Volume(issue)/page/year:
41,558,1947
** MUTATION DATA **
TYPE OF TEST : Mutation in microorganisms
TEST SYSTEM : Bacteria - Salmonella typhimurium
DOSE/DURATION : 5 ug/plate
REFERENCE :
SAIGBL Sangyo Igaku.Japanese Journal of Industrial Health.(Nippon Sangyo
Eisei Igakkai, Kosu Eisei Bldg., 1-29-8, Shinjuku, Shinjuku-ku, Tokyo 160, 2 1 2 下一页 尾页