求体外抗ADP诱导的血小板聚集作用的实验方法,具体的实验步骤。
本试验采用正常家兔富含血小板的血浆,以5-腺苷二磷酸二钠盐(ADP)为促凝剂,通过血小板聚集仪观测血小板聚集曲线,以5分钟内血小板凝集率达的最大峰值(PAG-M)为观测指标,比较给药各组与空白对照组(生理盐水)血小板聚集率。
二、实验试剂器材准备
枸橼酸钠:3.8%
阿司匹林ASA 丹酚酸B SAB (4 mM)
诱导剂5-腺苷二磷酸二钠盐ADP :400 mM
生理盐水NS
血小板聚集测试仪、离心机
三、实验简要步骤
(1)PRP和PPP的制备
实验时取家兔动脉血,并以3.8%柠檬酸钠抗凝,取血量与抗凝剂的比例为9:1(V/V),缓慢颠倒充分混匀。分装于试管中,自动平衡离心机,1000 r/min离心10分钟(4 ℃条件下),用取样器,小心吸取上层液,即富含血小板血浆(PRP),室温下放置备用。将上述已吸取PRP的血再次离心,3000 r/min离心10 min。待离心机自然停止后取出样本,上层贫血小板的血浆即为PPP,小心吸取上层PPP备用。作为测定时的对照或调节PRP中的血小板数。
(2)按比浊法进行血小板聚集测定
这个方法适用于人的血小板聚集实验吗?加药量要调整吗
本试验采用正常家兔富含血小板的血浆,以5-腺苷二磷酸二钠盐(ADP)为促凝剂,通过血小板聚集仪观测血小板聚集曲线,以5分钟内血小板凝集率达的最大峰值(PAG-M)为观测指标,比较给药各组与空白对照组(生理盐水)血小板聚集率。
二、实验试剂器材准备
枸橼酸钠:3.8%
阿司匹林ASA 丹酚酸B SAB (4 mM)
诱导剂5-腺苷二磷酸二钠盐ADP :400 mM
生理盐水NS
血小板聚集测试仪、离心机
三、实验简要步骤
(1)PRP和PPP的制备
实验时取家兔动脉血,并以3.8%柠檬酸钠抗凝,取血量与抗凝剂的比例为9:1(V/V),缓慢颠倒充分混匀。分装于试管中,自动平衡离心机,1000 r/min离心10分钟(4 ℃条件下),用取样器,小心吸取上层液,即富含血小板血浆(PRP),室温下放置备用。将上述已吸取PRP的血再次离心,3000 r/min离心10 min。待离心机自然停止后取出样本,上层贫血小板的血浆即为PPP,小心吸取上层PPP备用。作为测定时的对照或调节PRP中的血小板数。
(2)按比浊法进行血小板聚集测定
这个方法适用于人的血小板聚集实验吗?加药量要调整吗