0.8ml/min，20微升，27℃，254nm，5%甲醇+95%磷酸三乙胺水。安捷伦1200。
这是个单标，峰尖锯齿了一下，结果就显示是两个峰了，怎么回事呢？
同样的条件，混标里跑的时候（下图），这个单标又没有分叉了。
0.8ml/min，20微升，27℃，254nm，5%甲醇+95%磷酸三乙胺水。安捷伦1200。
这是个混标，总共6个标准品，各单标的色谱条件完全一样，没有设置什么梯度。标品是用水溶解。
1、第一个和第二个出峰时间比较接近，怎么分开呢？把流速调到0.6后没有差异。
2、第三个和第四个几乎是同时出峰，完全套一起了，怎么分开呢？
3、第五和第六个峰宽怎么比前几个宽呢，会是什么原因，需要调整吗？
4、六个标品的浓度和进样体积都一样，可第一个就高的看不到顶，后面的也高高矮矮的，要不要调整？
更换色谱柱试试。调整流动相比例。
建议，调整流动相的比例，做混标时，将1的量减少，6的量可以适当增加。
梯度冲， 换其他填料或厂家的柱子。继续摸索吧
单标的浓度有点大，所以分叉。至于分不开，两个办法，一是流动相变一下，梯度或变比例；二是换个厂家的色谱柱。
谢谢各位意见，今天又试了一下，原先5%的甲醇降至3%，出峰时间延长，套一起的峰也没分开；升至10%，保留时间缩短，峰更挤了。
因为出峰时间这么接近，我不知道怎么设置梯度。
我只有这一根柱子。
只有这一根柱子？你们老板也太抠门了杂！就一根柱子报废了搞毛？！
图1中的峰高比图2中大，可能会出现分叉。您可试试降低浓度进样。或者样品本身不纯如降解。
1.流速对分离度的影响不大，影响2个峰之间的分离度主要是各组分在流动相和固定相中的分配系数
2.根据流动相，甲醇已经是5%了，不能再低了。故可考虑在甲醇中加入一定量的四氢呋喃（自己试过，很好用，而且在254nm，四氢呋喃吸收可以忽略），再或者是调下pH值，考察各峰对pH值的敏感程度。
实在不行的话，可以考虑将3和4另行建立分析方法。
3.前面的峰，一般会比后面的峰尖锐。这是因为1号峰在柱内比较集中，而后面的峰在柱内相对分散，故会变宽。
4.因为每个组分的响应因子不一致，故会导致峰高、面积的不一致，这个是很正常的。样品浓度是根据你的需要来制定的，并不要求每个峰高都一致。
您的6个峰在20min内出完，结合流动相，个人认为不需要设置梯度。
不瞒您说，就这根还是捡别人的
谢谢您，仔细看过了，会按照您的建议尝试一下，谢谢。
捡别人的破柱子，再好的液相条件都不可能得到理想结果，何况六个标样。
问问老板想吃鱼要不要买葱买姜……
个人以为调pH值时如果用pH计而不是用试纸，就应该能解决……
规范了操作才能知道方法是否可行……
换用其他条件及换柱子等应在方法符合规定之后进行……
这个不敢的，还想多活一段日子，呵呵
晓得了，改正
我觉得你们老板真太抠了...这样怎么保证药品质量啊？
c18柱一般要求有机相不低于5%。
建议先将进样量改为５微升看看结果点样
柱效多少？看样品的峰，貌似柱子不好了，
1调整PH，同时尝试替换盐的类型
2 峰分叉可能是预柱脏了，
我也发表下意见，
1.单标分叉，混，标不分叉；如果标液的溶剂条件也是一样的话，从峰高可以看出，单标的浓度明显高于混标；你的柱子还不好，所以样品很容易过载或接近过载就会出现分叉或平顶峰的情况。办法减少进样量，标液稀释或进样体积减少。
2. 峰分不开一般就是降低有机相的浓度或梯度去分离；不过你有机相5%达到了一般的最低水平，不太好调，可以换梯度试试。
3.峰宽并不是衡量跑出来的峰合不合要求的参数，看看理论塔板数，塔板数满足要求峰再宽也可以，还有就是拖尾因子等，如果是跑梯度的话后面加大有机相的浓度峰宽自然就变窄了。
希望对你有帮助，其他人的换柱子和分开进行分析也是比较好的建议。
峰接近或分不开，可以调整流动性比例、尝试其他流动相体系还有换柱子
峰变宽及峰分叉与进样量和流动性PH有关，可以减少进样量，调整PH
峰面积不一与各物质响应因子有关，
这是个单标，峰尖锯齿了一下，结果就显示是两个峰了，怎么回事呢？
同样的条件，混标里跑的时候（下图），这个单标又没有分叉了。
0.8ml/min，20微升，27℃，254nm，5%甲醇+95%磷酸三乙胺水。安捷伦1200。
这是个混标，总共6个标准品，各单标的色谱条件完全一样，没有设置什么梯度。标品是用水溶解。
1、第一个和第二个出峰时间比较接近，怎么分开呢？把流速调到0.6后没有差异。
2、第三个和第四个几乎是同时出峰，完全套一起了，怎么分开呢？
3、第五和第六个峰宽怎么比前几个宽呢，会是什么原因，需要调整吗？
4、六个标品的浓度和进样体积都一样，可第一个就高的看不到顶，后面的也高高矮矮的，要不要调整？
更换色谱柱试试。调整流动相比例。
建议，调整流动相的比例，做混标时，将1的量减少，6的量可以适当增加。
梯度冲， 换其他填料或厂家的柱子。继续摸索吧
单标的浓度有点大，所以分叉。至于分不开，两个办法，一是流动相变一下，梯度或变比例；二是换个厂家的色谱柱。
谢谢各位意见，今天又试了一下，原先5%的甲醇降至3%，出峰时间延长，套一起的峰也没分开；升至10%，保留时间缩短，峰更挤了。
因为出峰时间这么接近，我不知道怎么设置梯度。
我只有这一根柱子。
只有这一根柱子？你们老板也太抠门了杂！就一根柱子报废了搞毛？！
图1中的峰高比图2中大，可能会出现分叉。您可试试降低浓度进样。或者样品本身不纯如降解。
1.流速对分离度的影响不大，影响2个峰之间的分离度主要是各组分在流动相和固定相中的分配系数
2.根据流动相，甲醇已经是5%了，不能再低了。故可考虑在甲醇中加入一定量的四氢呋喃（自己试过，很好用，而且在254nm，四氢呋喃吸收可以忽略），再或者是调下pH值，考察各峰对pH值的敏感程度。
实在不行的话，可以考虑将3和4另行建立分析方法。
3.前面的峰，一般会比后面的峰尖锐。这是因为1号峰在柱内比较集中，而后面的峰在柱内相对分散，故会变宽。
4.因为每个组分的响应因子不一致，故会导致峰高、面积的不一致，这个是很正常的。样品浓度是根据你的需要来制定的，并不要求每个峰高都一致。
您的6个峰在20min内出完，结合流动相，个人认为不需要设置梯度。
不瞒您说，就这根还是捡别人的
谢谢您，仔细看过了，会按照您的建议尝试一下，谢谢。
捡别人的破柱子，再好的液相条件都不可能得到理想结果，何况六个标样。
问问老板想吃鱼要不要买葱买姜……
个人以为调pH值时如果用pH计而不是用试纸，就应该能解决……
规范了操作才能知道方法是否可行……
换用其他条件及换柱子等应在方法符合规定之后进行……
这个不敢的，还想多活一段日子，呵呵
晓得了，改正我觉得你们老板真太抠了...这样怎么保证药品质量啊？
c18柱一般要求有机相不低于5%。
建议先将进样量改为５微升看看结果点样
柱效多少？看样品的峰，貌似柱子不好了，
1调整PH，同时尝试替换盐的类型
2 峰分叉可能是预柱脏了，
我也发表下意见，
1.单标分叉，混，标不分叉；如果标液的溶剂条件也是一样的话，从峰高可以看出，单标的浓度明显高于混标；你的柱子还不好，所以样品很容易过载或接近过载就会出现分叉或平顶峰的情况。办法减少进样量，标液稀释或进样体积减少。
2. 峰分不开一般就是降低有机相的浓度或梯度去分离；不过你有机相5%达到了一般的最低水平，不太好调，可以换梯度试试。
3.峰宽并不是衡量跑出来的峰合不合要求的参数，看看理论塔板数，塔板数满足要求峰再宽也可以，还有就是拖尾因子等，如果是跑梯度的话后面加大有机相的浓度峰宽自然就变窄了。
希望对你有帮助，其他人的换柱子和分开进行分析也是比较好的建议。
峰接近或分不开，可以调整流动性比例、尝试其他流动相体系还有换柱子
峰变宽及峰分叉与进样量和流动性PH有关，可以减少进样量，调整PH
峰面积不一与各物质响应因子有关，