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PBS缓冲液应该如何配置,离子强度指的是什么啊

时间: 2012-03-27 00:51:01 作者: 来源: 字号:
给位大侠,如果我想配置PH 7.2 离子强度0.01 0.02 0.05 0.1 0.5 的PBS缓冲液应该如何配置啊?谢谢




磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法


0.01M PBS

PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4,pH 7.2)

PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L

称7.9g NaCl,0.2g KCl,0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4,溶于800 ml 蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4℃冰箱中即可。

需要注意的是,通常所说的浓度0.01 M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。

母液的配制:

0.2M Na2HPO4:称取 71.6g Na2HPO4-12H2O,溶于 1000ml 水

0.2M NaH2PO4:称取 31.2g NaH2PO4-2H2O,溶于1000ml 水

各种浓度PB(pH=7.4)的配制:

先配 0.2M PB (pH=7.4,100ml):取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4, 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。

然后 只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释 即可,如:

0.1M PB(PH=7.4) :取 500ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可。

0.01M PB (PH=7.4):取50ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可。

0.02M PB (PH=7.4):取100ml 0.2 M PB,加水稀释至 1000ml 即可。

若需要 NaCl的话,加入 NaCl 至0.9%(g/100ml)即可。

另:其它各种另 PH值的 0.2M PB(100ml)配方 :

pH 0.2M NaH2PO4(ml) 0.2M Na2HPO4(ml)

5.7 93.5 6.5

5.8 92 8

5.9 90 10

6.0 87.7 12.3

6.1 85 15

6.2 81.5 18.5

6.3 77.5 22.5

6.4 73.5 26.5

6.5 68.5 31.5

6.6 62.5 37.5

6.7 56.5 43.5

6.8 51 49

6.9 45 55

7.0 38 62

7.1 33 67

7.2 28 72

7.3 23 77

7.4 19ml 81ml

7.5 16 84

7.6 13 87

7.7 10.5 90.5

7.8 8.5 91.5

7.9 7 93

8.0 5.3 94.7

0.01M磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法

称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌(至少20分钟),保存存于室温或4℃冰箱中。

需要注意的是,通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。

PH 7.6 7.4 7.2 7.0

H2O 1000 1000 1000 1000

NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5

Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2

NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4

根据经验来看,新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间,可是在温度的影响下,尤其在夏天,其电离常数发生了改变,在经过昼夜的时间后,PH值会明显改变(我亲自测过偏酸)。所以做实验的同学可要注意了,PH值可能会影响实验结果,甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气,要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS,如果发生偏酸或偏碱,注意重新换新液。

PBS缓冲液

称取NaCl 8g,KCl 0.2g,Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g,溶于900ml双蒸水中,用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L,常温保存备用。

PBST缓冲液

取300μl Tween-20 加入PBS 100ml中,混匀后即刻使用。现用现配。

如果是把所有固体加大十倍,配置为浓缩液,工作时候十倍稀释,那么,在刚配好浓缩液时,PH在6.5左右,明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调,但是有更方便的方法。

十倍稀释以后,PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试,配好之后再测一次~

PH8.0的PBS配方详细

1. NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至8.0,然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。  2    1 2 下一页 尾页
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