供试品溶液的制备：取本品细粉适量（相当于盐酸二甲双胍50mg），置100mL量瓶中，加流动相适量，超声处理使盐酸二甲双胍溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
另取双氰胺对照品适量，精密称定，用水溶解并稀释制成每mL中约含0.1mg的溶液，作为双氰胺对照品溶液。
分别精密量取上述两种溶液各0.5mL，置同一100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
取对照溶液10μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使双氰胺色谱峰的峰高约为满量程的10%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸二甲双胍保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有与双氰胺峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算（按盐酸二甲双胍标示量计算），其含量不得过0.10%，其它单个杂质峰面积不得大于对照溶液中盐酸二甲双胍峰面积，其他杂质峰面积的和不得大于对照溶液中对照溶液中盐酸二甲双胍峰面积的3倍。（此为药典中有关物质的检查方法）
此为自身对照法还是杂质对照法，如果为杂质对照法，那对照溶液的配置意义为何？
希望有大家出谋划策，不胜感激!
呵呵，忘记发帖最主要的任务了，线性试验中浓度的范围？设计依据？谢谢大家！
～～问题一、自身对照，还是杂质对照？～～
答：两者都有。双氰胺作为已知杂质，采用的是杂质对照；而其他未知杂质，采用不加校正因子的自身对照。
～～问题二、对照配制的意义为何？～～
答：供试品溶液终浓度为0.5mg/ml；双氰胺对照溶液终浓度为5ug/ml；二甲双胍自身对照溶液终浓度为5ug/ml。
则：2个对照溶液的浓度，相对于供试品溶液来说，就是规定的限度0.10％。
～～问题三、线性试验浓度的范围～～
方案1：5ug/ml及以下，取5个点。如1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml、4ug/ml、5ug/ml。
方案2：5ug/ml为中点，取5个点。如1ug/ml、3ug/ml、5ug/ml、7ug/ml、10ug/ml。
～～关于最小浓度选择的依据～～
最低浓度之所以选1ug/ml，是因为其对应着0.02％的杂质含量，一般0.02％以下可以忽略不计，所以再低一些的浓度不必做了；
但是，如果某个杂质要求的限度很低，另当别论，要继续拉低浓度。
～～关于最大浓度选择的依据～～
方案1中最高浓度设到5ug/ml的限度，是因为样品如果超限，那么定量就没有太大意义了，所以更高的浓度可以不考察；
方案2中最高浓度设到较大一些，是因为这样可以有效的对比超标样品的真正差异，对药物的前期研究，尤其是合成人员有一定的帮助。
～～结论～～
基本情况就是这样，根据自己的项目情况和需求，进行细节调整就好了。
再补充一句：5个点是最小要求，你也可以做7个点。
好冷清
猜测一下，楼主是美女
castor1997d的回答很有见解，但是还是有地方不太懂，在解决了双氰胺的线性考察后，请问其他未知杂质的应该如何再进行方法验证？
其他杂质，用降解实验做专属性。
有关物质,已知杂质定量分析是线性要做,但其线性的范围不同意上述说法.
应是:
线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为：
在定量限至一定的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定该杂质峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。
可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.990，Y轴截距应在100％响应值的25％以内，响应因子的相对标准差应不大于10%。
此话具体来源见:审评中心-黄晓龙-<<有关物质分析方法验证的可接受标准简介>>
http://www.cde.org.cn/dzkw.do?method=largePage&id=1463
楼主您好！请问您盐酸二甲双胍的有关物质的测定具体用的什么柱子和流动相啊???请赐教！我现在按CHP2010的方法双氰胺和三聚氰胺根本分不开，并且BP2010和EP7.0的方法也与CHP2010的方法一样，所以很困惑！！请各位做过二甲双胍的好人们指教了！
另取双氰胺对照品适量，精密称定，用水溶解并稀释制成每mL中约含0.1mg的溶液，作为双氰胺对照品溶液。
分别精密量取上述两种溶液各0.5mL，置同一100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
取对照溶液10μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使双氰胺色谱峰的峰高约为满量程的10%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸二甲双胍保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有与双氰胺峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算（按盐酸二甲双胍标示量计算），其含量不得过0.10%，其它单个杂质峰面积不得大于对照溶液中盐酸二甲双胍峰面积，其他杂质峰面积的和不得大于对照溶液中对照溶液中盐酸二甲双胍峰面积的3倍。（此为药典中有关物质的检查方法）
此为自身对照法还是杂质对照法，如果为杂质对照法，那对照溶液的配置意义为何？
希望有大家出谋划策，不胜感激!
呵呵，忘记发帖最主要的任务了，线性试验中浓度的范围？设计依据？谢谢大家！
～～问题一、自身对照，还是杂质对照？～～
答：两者都有。双氰胺作为已知杂质，采用的是杂质对照；而其他未知杂质，采用不加校正因子的自身对照。
～～问题二、对照配制的意义为何？～～
答：供试品溶液终浓度为0.5mg/ml；双氰胺对照溶液终浓度为5ug/ml；二甲双胍自身对照溶液终浓度为5ug/ml。
则：2个对照溶液的浓度，相对于供试品溶液来说，就是规定的限度0.10％。
～～问题三、线性试验浓度的范围～～
方案1：5ug/ml及以下，取5个点。如1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml、4ug/ml、5ug/ml。
方案2：5ug/ml为中点，取5个点。如1ug/ml、3ug/ml、5ug/ml、7ug/ml、10ug/ml。
～～关于最小浓度选择的依据～～
最低浓度之所以选1ug/ml，是因为其对应着0.02％的杂质含量，一般0.02％以下可以忽略不计，所以再低一些的浓度不必做了；
但是，如果某个杂质要求的限度很低，另当别论，要继续拉低浓度。
～～关于最大浓度选择的依据～～
方案1中最高浓度设到5ug/ml的限度，是因为样品如果超限，那么定量就没有太大意义了，所以更高的浓度可以不考察；
方案2中最高浓度设到较大一些，是因为这样可以有效的对比超标样品的真正差异，对药物的前期研究，尤其是合成人员有一定的帮助。
～～结论～～
基本情况就是这样，根据自己的项目情况和需求，进行细节调整就好了。
再补充一句：5个点是最小要求，你也可以做7个点。
好冷清
猜测一下，楼主是美女
castor1997d的回答很有见解，但是还是有地方不太懂，在解决了双氰胺的线性考察后，请问其他未知杂质的应该如何再进行方法验证？
其他杂质，用降解实验做专属性。
有关物质,已知杂质定量分析是线性要做,但其线性的范围不同意上述说法.
应是:
线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为：
在定量限至一定的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定该杂质峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。
可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.990，Y轴截距应在100％响应值的25％以内，响应因子的相对标准差应不大于10%。
此话具体来源见:审评中心-黄晓龙-<<有关物质分析方法验证的可接受标准简介>>
http://www.cde.org.cn/dzkw.do?method=largePage&id=1463
楼主您好！请问您盐酸二甲双胍的有关物质的测定具体用的什么柱子和流动相啊???请赐教！我现在按CHP2010的方法双氰胺和三聚氰胺根本分不开，并且BP2010和EP7.0的方法也与CHP2010的方法一样，所以很困惑！！请各位做过二甲双胍的好人们指教了！