高聚体的峰高与单体与高聚体之间的谷高比应大于2.0,达不到怎么办呢?是什么原因?
柱子重新装
把灵敏度调整一下就好了
你这个应该是参考药典用传统的sephadex G-10系统分析水溶性抗生素的聚合物吧,如果分离度达不到要求,那有以下三种方法尝试改善
(一)调整流动相
1、改变流动相组分
有研究表明,头孢菌素侧链中具有丰富的π电子、较长共轭双键、芳香环结构等情况时,流动相组成对其在G-10凝胶中的吸附有干扰作用。药典中流动相组成一般都是磷酸盐体系,但是研究表明硫酸铵、柠檬酸钠等组成流动相时对单分子的主成份吸附干扰更小,可以使主成分获得良好保留,而高聚物总归是零保留的,因而提升两者分离度。
2、提高流动相缓冲盐离子强度
缓冲液盐浓度越大,单分子主成分保留越长,而高聚物总归是零保留的,因而提升两者分离度。
3、适当降低流速
流速降低对零保留的高聚物影响较小,而对单分子主成份保留相对大一点,因此可以尝试降低流速;
(二)调整固定相
如二楼所说,可以重填色谱柱,提高固定相的效能
(三)换体系
传统的sephadex G10分离度差、重现性差、分析时间长,现在已经有高效的聚合物分析体系出现了,比如某某公司(不做广告
)的聚合物基质、硅胶基质的排阻色谱柱,分离度高、重现性好,快捷方便,还能用于分析水难溶性组分,应该代表了未来的方向,不妨试验一下
柱子重新装
把灵敏度调整一下就好了
你这个应该是参考药典用传统的sephadex G-10系统分析水溶性抗生素的聚合物吧,如果分离度达不到要求,那有以下三种方法尝试改善
(一)调整流动相
1、改变流动相组分
有研究表明,头孢菌素侧链中具有丰富的π电子、较长共轭双键、芳香环结构等情况时,流动相组成对其在G-10凝胶中的吸附有干扰作用。药典中流动相组成一般都是磷酸盐体系,但是研究表明硫酸铵、柠檬酸钠等组成流动相时对单分子的主成份吸附干扰更小,可以使主成分获得良好保留,而高聚物总归是零保留的,因而提升两者分离度。
2、提高流动相缓冲盐离子强度
缓冲液盐浓度越大,单分子主成分保留越长,而高聚物总归是零保留的,因而提升两者分离度。
3、适当降低流速
流速降低对零保留的高聚物影响较小,而对单分子主成份保留相对大一点,因此可以尝试降低流速;
(二)调整固定相
如二楼所说,可以重填色谱柱,提高固定相的效能
(三)换体系
传统的sephadex G10分离度差、重现性差、分析时间长,现在已经有高效的聚合物分析体系出现了,比如某某公司(不做广告
