我使用的TSK3000SW型7.5*600的色谱柱,我们做了很多年,发现每根色谱柱只能使用到80-100批次(最多一次有用过200批,仅一次而已)的样品就发现柱子不行了。我想请各位大侠帮忙找一下原因!!谢谢!!!
我们的处理方法:
新柱子的使用和处理:先使用超纯水以0.2ml/min流速冲洗过夜,后以0.5mol/l磷酸二氢钠以0.4ml/min流速洗至基线平稳(一般是5个柱体积),然后再以1%异丙醇以0.2ml/min流速过夜。
流动相:磷酸二氢钠5.0321g,磷酸氢二钠24.2736g,加水500ml使之溶解,加异丙醇5ml,混匀,PH值为7.0。过0.45膜,超声30分钟备用。
色谱柱工作一天后用1%异丙醇以0.2ml/min流速冲洗过夜。
长时间不用柱子(如周末、放长假)用先使用超纯水以0.2ml/min流速冲洗过夜,后以0.5mol/l磷酸二氢钠以0.4ml/min流速洗至基线平稳(一般是5个柱体积),然后再以1水以0.2ml/min流速过夜。再0.05%叠氮钠溶液以0.2ml/min流洗(15h以上)。之后取下色谱柱,于30度以下常温保存。
你好,我也一只用凝胶色谱柱,大概用了将近一年了。
色谱柱型号:TSK-GEL G5000PWXL。我们一直用了保护柱(TSK-GEL)。
流动相:磷酸二氢钾,磷酸氢二钾,加水溶解,pH值7.8。
我们用下来,发现,保护柱的柱压升高很快,不知道你们是否用保护柱,如果不用的话,那柱子的寿命肯定短。
再问一下,你所说的柱子 不能用了,是峰型变差了,柱效变低了,还是柱压变高而不能用了。
用这种柱子的好像比较少,总算找到知音了,能否讨论讨论呢。
你好,我也一只用凝胶色谱柱,大概用了将近一年了。
色谱柱型号:TSK-GEL G5000PWXL。我们一直用了保护柱(TSK-GEL)。
流动相:磷酸二氢钾,磷酸氢二钾,加水溶解,pH值7.8。
我们用下来,发现,保护柱的柱压升高很快,不知道你们是否用保护柱,如果不用的话,那柱子的寿命肯定短。
再问一下,你所说的柱子 不能用了,是峰型变差了,柱效变低了,还是柱压变高而不能用了。
用这种柱子的好像比较少,总算找到知音了,能否讨论讨论呢。
我有用在线过滤器的,那边的工程师说没问题的。
我也问了他们本部的工程师
他们也解决不了
我也想找个用这种柱子的,今天终于看到你了。呵呵........
柱压原先使用的时候也是升高的挺快,到后来改进方法(离子效应的作用)用0.5mol/l磷酸二氢钠以0.4ml/min流速洗至基线平稳就好了很多。
我们判断柱子不行了是因为我们做血液制品的分子大小分布,单体加二聚体的含量要在98%以上,要高于国家标准。当我们发现柱效低于600的时候就判断柱子不行了。
你们一般一根柱子可以做多少批次啊?
用的勤快吗?一次大概做多少批?一个月用几次?
不好意思,最近忙辞职的事情,一直没有来看看。
关于这个色谱柱,我们找工程师,都找了好几回了,也一直没有解决问题。
我们问题主要是表现在柱压的升高。因为凝胶柱承受的压力小。我们使用的凝胶柱最大不能超过2Mpa。现在发现压力都升高在预柱上了,所以现在我们采取的对策是把压力上限调高。因为柱子上的压力一直小于2Mpa,所以现在是牺牲预柱了。
我们做得也还频繁。一次大概十几批。每个星期有一次。曾经一次性做了将近200批。现在还没有换过柱子。听说柱子要买好点的。我们这根是将近1W,上次听一个兄弟说他们买的是1.5W的。
不好意思,最近忙辞职的事情,一直没有来看看。
关于这个色谱柱,我们找工程师,都找了好几回了,也一直没有解决问题。
我们问题主要是表现在柱压的升高。因为凝胶柱承受的压力小。我们使用的凝胶柱最大不能超过2Mpa。现在发现压力都升高在预柱上了,所以现在我们采取的对策是把压力上限调高。因为柱子上的压力一直小于2Mpa,所以现在是牺牲预柱了。
我们做得也还频繁。一次大概十几批。每个星期有一次。曾经一次性做了将近200批。现在还没有换过柱子。听说柱子要买好点的。我们这根是将近1W,上次听一个兄弟说他们买的是1.5W的。
凝胶色谱柱的保存也很重要,我们都是用含0.05%叠氮钠的洗脱液的,这样有助于防止细菌繁殖。
终于找到知己了,呵呵,我们也遇到了同样的问题,现在也没有解决的办法,我们用了才3个多月吧,1万买的,现在就不行了,主要是柱效下降,检测不出来,峰行变宽,三个峰现在成了两个峰,还不敢给领导汇报呢,
流动相:磷酸二氢钾,磷酸氢二钾,加水溶解,异丙醇50ml,PH7.0。
我也用过这种柱子,大概用一年左右柱效就变低。不过好像用流动相冲柱子久点,然后再拆了柱子用异丙醇洗系统,再用就会好一点。异丙醇我们是不用来直接冲柱子的。
我一直使用预柱的,觉得预柱的功能还是发挥得很大。因为我们柱效没有下降过,主要是柱压的升高,而柱压的升高主要表现在预柱压力的升高。所以我们做一阵子,发现预柱压力有明显升高后,就用0.2mol/L的NaOH溶液反向冲洗预柱(流速0.3mol/L),效果很显著,可以明显看到柱压的下降(从1.8MPa下降到0.6MPa),然后再用水正向冲洗预柱。这个方法屡试不爽。但是做了一年之后,发现,预柱的压力升高频率变快,每做一次,大概十几批样品,预柱压力就升高了不少。而且用以前的方法处理(碱反冲),虽然能降低一些压力,但是已经不能降到以前的水平。我们怀疑是有一些不溶于碱的杂质进了预柱,而冲洗不下来,导致的柱压升高。所以现在我们采取的方法是,做完一次,仍然用碱反冲预柱,能降多少算多少。然后把压力上限提高。这样仍能继续做样。我们的柱子一直保护得很好,柱压没有升高,柱效也没有下降。所以建议大家还是要用预柱。预柱我们用的同柱子一样的品牌,大约3千一根。这样也能只牺牲预柱,节约不少钱。更何况现在我们作样还是很顺利。用了一年多了。
个人意见,这个都是由于长时间的使用,流动相中的缓冲盐析盐在填料中导致的,一般冲洗无效的情况,可以试试卸下柱子里面的填料,自己用水多超声清洗几次,再装回柱子,不过装回去的问题还是有的,就是最后平口的时候注意慢慢装,填料不能太干,也不能太湿啊,尽量使填料填充踏实,我们一般不行了的话,就自己拆的,呵呵,好像拆了之后还能用几次,柱效肯定没有买的时候好,在没有办法的办法下,可以试试。(有言在先,柱子坏了我不负责哦:)) 2 1 2 下一页 尾页
我们的处理方法:
新柱子的使用和处理:先使用超纯水以0.2ml/min流速冲洗过夜,后以0.5mol/l磷酸二氢钠以0.4ml/min流速洗至基线平稳(一般是5个柱体积),然后再以1%异丙醇以0.2ml/min流速过夜。
流动相:磷酸二氢钠5.0321g,磷酸氢二钠24.2736g,加水500ml使之溶解,加异丙醇5ml,混匀,PH值为7.0。过0.45膜,超声30分钟备用。
色谱柱工作一天后用1%异丙醇以0.2ml/min流速冲洗过夜。
长时间不用柱子(如周末、放长假)用先使用超纯水以0.2ml/min流速冲洗过夜,后以0.5mol/l磷酸二氢钠以0.4ml/min流速洗至基线平稳(一般是5个柱体积),然后再以1水以0.2ml/min流速过夜。再0.05%叠氮钠溶液以0.2ml/min流洗(15h以上)。之后取下色谱柱,于30度以下常温保存。
你好,我也一只用凝胶色谱柱,大概用了将近一年了。
色谱柱型号:TSK-GEL G5000PWXL。我们一直用了保护柱(TSK-GEL)。
流动相:磷酸二氢钾,磷酸氢二钾,加水溶解,pH值7.8。
我们用下来,发现,保护柱的柱压升高很快,不知道你们是否用保护柱,如果不用的话,那柱子的寿命肯定短。
再问一下,你所说的柱子 不能用了,是峰型变差了,柱效变低了,还是柱压变高而不能用了。
用这种柱子的好像比较少,总算找到知音了,能否讨论讨论呢。
你好,我也一只用凝胶色谱柱,大概用了将近一年了。
色谱柱型号:TSK-GEL G5000PWXL。我们一直用了保护柱(TSK-GEL)。
流动相:磷酸二氢钾,磷酸氢二钾,加水溶解,pH值7.8。
我们用下来,发现,保护柱的柱压升高很快,不知道你们是否用保护柱,如果不用的话,那柱子的寿命肯定短。
再问一下,你所说的柱子 不能用了,是峰型变差了,柱效变低了,还是柱压变高而不能用了。
用这种柱子的好像比较少,总算找到知音了,能否讨论讨论呢。
我有用在线过滤器的,那边的工程师说没问题的。
我也问了他们本部的工程师
他们也解决不了
我也想找个用这种柱子的,今天终于看到你了。呵呵........
柱压原先使用的时候也是升高的挺快,到后来改进方法(离子效应的作用)用0.5mol/l磷酸二氢钠以0.4ml/min流速洗至基线平稳就好了很多。
我们判断柱子不行了是因为我们做血液制品的分子大小分布,单体加二聚体的含量要在98%以上,要高于国家标准。当我们发现柱效低于600的时候就判断柱子不行了。
你们一般一根柱子可以做多少批次啊?
用的勤快吗?一次大概做多少批?一个月用几次?
不好意思,最近忙辞职的事情,一直没有来看看。
关于这个色谱柱,我们找工程师,都找了好几回了,也一直没有解决问题。
我们问题主要是表现在柱压的升高。因为凝胶柱承受的压力小。我们使用的凝胶柱最大不能超过2Mpa。现在发现压力都升高在预柱上了,所以现在我们采取的对策是把压力上限调高。因为柱子上的压力一直小于2Mpa,所以现在是牺牲预柱了。
我们做得也还频繁。一次大概十几批。每个星期有一次。曾经一次性做了将近200批。现在还没有换过柱子。听说柱子要买好点的。我们这根是将近1W,上次听一个兄弟说他们买的是1.5W的。
不好意思,最近忙辞职的事情,一直没有来看看。
关于这个色谱柱,我们找工程师,都找了好几回了,也一直没有解决问题。
我们问题主要是表现在柱压的升高。因为凝胶柱承受的压力小。我们使用的凝胶柱最大不能超过2Mpa。现在发现压力都升高在预柱上了,所以现在我们采取的对策是把压力上限调高。因为柱子上的压力一直小于2Mpa,所以现在是牺牲预柱了。
我们做得也还频繁。一次大概十几批。每个星期有一次。曾经一次性做了将近200批。现在还没有换过柱子。听说柱子要买好点的。我们这根是将近1W,上次听一个兄弟说他们买的是1.5W的。
凝胶色谱柱的保存也很重要,我们都是用含0.05%叠氮钠的洗脱液的,这样有助于防止细菌繁殖。
终于找到知己了,呵呵,我们也遇到了同样的问题,现在也没有解决的办法,我们用了才3个多月吧,1万买的,现在就不行了,主要是柱效下降,检测不出来,峰行变宽,三个峰现在成了两个峰,还不敢给领导汇报呢,
流动相:磷酸二氢钾,磷酸氢二钾,加水溶解,异丙醇50ml,PH7.0。
我也用过这种柱子,大概用一年左右柱效就变低。不过好像用流动相冲柱子久点,然后再拆了柱子用异丙醇洗系统,再用就会好一点。异丙醇我们是不用来直接冲柱子的。
我一直使用预柱的,觉得预柱的功能还是发挥得很大。因为我们柱效没有下降过,主要是柱压的升高,而柱压的升高主要表现在预柱压力的升高。所以我们做一阵子,发现预柱压力有明显升高后,就用0.2mol/L的NaOH溶液反向冲洗预柱(流速0.3mol/L),效果很显著,可以明显看到柱压的下降(从1.8MPa下降到0.6MPa),然后再用水正向冲洗预柱。这个方法屡试不爽。但是做了一年之后,发现,预柱的压力升高频率变快,每做一次,大概十几批样品,预柱压力就升高了不少。而且用以前的方法处理(碱反冲),虽然能降低一些压力,但是已经不能降到以前的水平。我们怀疑是有一些不溶于碱的杂质进了预柱,而冲洗不下来,导致的柱压升高。所以现在我们采取的方法是,做完一次,仍然用碱反冲预柱,能降多少算多少。然后把压力上限提高。这样仍能继续做样。我们的柱子一直保护得很好,柱压没有升高,柱效也没有下降。所以建议大家还是要用预柱。预柱我们用的同柱子一样的品牌,大约3千一根。这样也能只牺牲预柱,节约不少钱。更何况现在我们作样还是很顺利。用了一年多了。
个人意见,这个都是由于长时间的使用,流动相中的缓冲盐析盐在填料中导致的,一般冲洗无效的情况,可以试试卸下柱子里面的填料,自己用水多超声清洗几次,再装回柱子,不过装回去的问题还是有的,就是最后平口的时候注意慢慢装,填料不能太干,也不能太湿啊,尽量使填料填充踏实,我们一般不行了的话,就自己拆的,呵呵,好像拆了之后还能用几次,柱效肯定没有买的时候好,在没有办法的办法下,可以试试。(有言在先,柱子坏了我不负责哦:)) 2 1 2 下一页 尾页